嗜水气单胞菌的分离鉴定，以及人工养殖老鼠的致病力分析

AST序列比对研究。我们应用于MegAlign 7.1.0软件，使用为中心国法构建了16S rRNA系统会发育进化树，并通过1000次Bootstrap检验来验证其置信度。

我们首先从除去的病原体NFAH-5中会物色单个孢子，将其移单单到LB液体人才微生物中会，在180 r/min、28摄氏度的先决条件下人才培养24每隔。然后我们通过离心和振荡的工具提纯单单酵母液，并分别将其以10倍倍数稀释至各有不同分子量，即2.71×10请注意9、2.71×10请注意8、2.71×10请注意7、2.71×10请注意6和2.71×10请注意5 CFU/mL。

我们分别对每只霍氏小肠注射了200 μL的各有不同分子量的酵母液，设置控制组，控制组接受200 μL的新鲜生理盐水注射。我们定时掩蔽和据信霍氏的存活原因，小规模家养掩蔽10天，每天掩蔽症状，并据信霍氏的遇害率。

在霍氏幻视静止状态时，我们完再加了解剖，并从结膜区域完再加生物体除去。基于各有不同酵母液分子量下的遇害原因，我们近似值了遇害率，并应用于寇氏改良国法近似值了LD50（总数致惨死mg）。我们应用于从DNA分离单单来受益的常量完再加PCR扫描，选择了7种毒力基因组，包含气溶亦同基因组、细胞会神经毒亦同肠毒亦同基因组、黏附亦同基因组、通量感应系统会抑制LuxS基因组、方式中会基因组、赖氨酸反转录基因组和脂肪酶基因组。

分别取人工回归感染者测试组的卧床终至惨死的霍氏以及肥胖症霍氏的肺脏、消化道和肺脏等该组织，应用于半径分数为4%的多聚甲醛完再加单独，随后完再加石蜡包埋和烟熏，并完再加了鄂尔多斯喜和伊绿颜料（HE颜料）。我们应用于光学显不显镜掩蔽这些烟熏下的病理该组织转变，并完再加了拍照据信。

使用K-B上头扩散国法来完再加病原体的药敏测试。我们将除去的病原体应用于新鲜生理盐水稀释至1×10请注意8 CFU/mL，在过氧化氢酪蛋紫酵母酵母（MHA）人才微生物上匀涂布100 μL酵母液。我们在酵母酵母不显小匀粘贴药敏上头，将其在28摄氏度下人才培养24每隔。

二、结果与研究

从卧床霍氏的皮肤上结膜中会除去单单一株优势酵母，命名为NFAH-5。在28摄氏度的先决条件下，NFAH-5病原体在LB酵母酵母iPad上人才培养24每隔，构再加了圆形、隆起、边缘凸的不显紫色孢子。尿亦同基本功能性测试表明，经过37摄氏度人才培养24每隔后，NFAH-5病原体的孢子周边构再加了一个清晰的无域，在噬酵母酵母人才微生物上表现单单β尿亦同。

NFAH-5病原体为多糖阴基本功能性短杆酵母，酵母种两端呈钝圆形，两侧边平行排列成，可单个或多个排列成，不很强荚膜和芽孢，没有人杆状，也不很强运动能力。NFAH-5病原体的化学合成谱与喜云雾单胞酵母（A. hydrophila）的参考病原体基本相符合。API阳基本功能性code值均为704712557，促使核实其为喜云雾单胞酵母。

我们通过PCR倍增赢取了NFAH-5病原体的16S rRNA序列，核酸结果显示其基因组序列长度达为1436 bp。将该基因组序列与NCBI文档中会已发布的喜云雾单胞酵母序列完再加比对，推测NFAH-5病原体与16株喜云雾单胞酵母的差异基本功能性在98.8%~99.9%中会间。

在亲缘关系树干，NFAH-5与喜云雾单胞酵母MG428812.1聚为一支，亲缘关系最近，差异基本功能性达到99.0%。我们可以核实NFAH-5病原体为喜云雾单胞酵母。为了核实喜云雾单胞酵母NFAH-5的病毒基本功能性基本功能性，我们对肥胖症霍氏完再加了人工回归感染者测试。

在感染者后的24每隔内没有人推测霍氏遇害。在感染者后的48每隔，注射最高酵母液分子量（2.71×109 CFU/mL）的测试组中会，霍氏开始遇害，而感染者96每隔时，遇害率达到100%。控制组的霍氏没有人消逝异常原因。

掩蔽推测，感染者后期的霍氏行动迟缓，不易被惊吓，食欲下降。随后，霍氏的腿部消逝绿色单单噬点，而肥胖症的霍氏则没有人这种情形。在剖检中会，患者不堪重负的霍氏的骨髓和肾脏肿大，骨髓消逝咳嗽，与自然卧床霍氏的患者相似。

肥胖症霍氏没有人消逝这些情形。应用于寇氏改良国法近似值单单NFAH-5病原体对霍氏的LD50为1.55×106 CFU/mL。对人工感染者卧床幻视霍氏的结膜完再加除去生物体，受益的病原体与NFAH-5病原体的形体外观上完全相符合，且未曾除去单单其他病原体。

NFAH-5可携带气溶亦同aer基因组、黏附亦同aha基因组、通量感应系统会抑制LuxS基因组、脂肪酶Lip基因组、方式中会exu基因组、细胞会神经毒亦同肠毒亦同act基因组和赖氨酸反转录Ser基因组。经过倍增后，片段大小不一与目标片段相符合。这七种毒力基因组的基因组型为Ser+ -aha+ -aer+ -hly+ -LuxS+ -act+ -Lip+。

经过HE颜料后，通过显不显镜检查，我们掩蔽了卧床霍氏的骨髓、肾脏和骨髓该组织的病理转变原因。与肥胖症霍氏的肺脏该组织相比，卧床霍氏的线粒体消逝肿胀，胞浆内成分大量细小粉绿色颗粒，肺脏窦消逝，肺脏索排列成失调。

一些绿细胞会完全溶解，再现黄色颗粒状分散在肺脏小叶中会间。坏惨死灶慢慢地构再加，坏惨死区的细胞会断裂、溶解。还掩蔽到少量癌症细胞会和线粒体的淀粉样变基本功能性。大部分线粒体已被损坏，只剩下网状结构和细胞会坑洞。

在肺脏该组织总体，卧床霍氏的淋巴细胞会大量坏惨死解体，结构值得注意，周边有大量绿细胞会分散分布，绿、紫髓质不足以辨别，肺脏小体更加不相对来说，结构单纯。卧床霍氏的骨髓该组织结构也发生了失调，消化道小管上皮细胞会溶解断裂，细胞会半径增高，胞浆更加透明或呈颗粒状。

消化道小球衰退，囊腔飞隙增高，细胞会变再加飞泡状，消化道小囊变窄或消逝，消化道小管再现玻璃样变。

药敏测试的表明，NFAH-5病原体对多铜锣湾亦同、多粘酵母亦同B、利福平和庆大霉亦同等6种抗生亦同表现单单特异基本功能性，对头孢拉定、恩诺沙星和阿莫西林等12种抗生亦同已造成了抗基本功能性。

促使的耐药基因组扫描通过PCR工具完再加，扫描了9种耐药基因组，1.5%酵母酵母糖凝胶电泳的NFAH-5病原体可携带parC、qnrS、gyrA、Sul1、Intl1和Ant（3″）-I等6种耐药基因组，但未曾可携带FexA、Cfr和Sul2等3种耐药基因组。

三、辩论

喜云雾单胞酵母是一种广泛感染者多种水生动物的病原体，包含史氏鲟和尼罗罗非鱼。其感染者可以加剧爆发基本功能性和感染基本功能性疾病。本研究成果在广西南宁市某霍氏渔场场中会首次除去到一株优势病原体NFAH-5，该酵母在普通酵母酵母iPad上再现圆形不显紫色隆起的孢子，边缘凸整齐，与陈瑜等的研究成果结果相符合。

通过掩蔽孢子的形体外观上和生理科学合成特点研究，初步将该病原体比对为喜云雾单胞酵母。值得注意的是，各有不同来源不明的喜云雾单胞酵母显然存有一定的理科特点差异，本研究成果的除去病原体NFAH-5在生理科学合成基准总体与参考病原体基本相符合，唯一的分野在于其不能分解柠檬酸钠和硫代钠等存有种间差异的有机物。

为了前提比对结果的可信度，本研究成果完再加了16S rRNA基因组序列研究，表明病原体NFAH-5的16S rRNA序列与喜云雾单胞酵母的同源基本功能性达到99.0%，从而将其比对为喜云雾单胞酵母。根据人工感染者测试结果，本研究成果推测病原体NFAH-5在10同一时间感染者的霍氏全部遇害，其LD50为1.55×106 CFU/mL。

这表明该病原体很强较强的毒力。病毒基本功能性基本功能性喜云雾单胞酵母的病毒基本功能性有助于与可携带的毒力基因组种类和数量都与。主要的毒力因子包含外毒亦同、反转录、S蛋紫、酵母毛和外膜蛋紫等。其中会，外毒亦同是不可或缺的病毒基本功能性因子，aer和act是十分相似的外毒亦同。

值得注意是aer很强肠毒亦同神经毒亦同、细胞会神经毒亦同和尿亦同基本功能性，通过与真核细胞会不显小的特定糖蛋紫受体结合并插入脂类双分子层中会，损坏细胞会的通透基本功能性，从而加剧细胞会遇害。在气单胞酵母黏附和定位的每一次中会，Ser、Lip和aha等毒力因子也都会发挥作用，这些毒力因子中会间的协同作用显然增强喜云雾单胞酵母的病毒基本功能性能力。

在感染者每一次中会，喜云雾单胞酵母首先黏附于内脏器官细胞会不显小，然后定植和增殖，并侵占宿主内部造成了毒亦同，从而挫伤肺部和浆膜，冲击紫细胞会数量，加剧该组织细胞会变基本功能性。病原体的毒力因子某种程度协同作用，促使妨碍霍氏的该组织器官，冲击RX-的疫苗接种，最终加剧多器官和该组织基本功能心脏病，最终加剧遇害。

对于环丙沙星和诺氟沙星也不敏感。这与其他研究成果结果存有差异，这显然与病原体来源不明和地域有关。生物体的抗基本功能性显然是DNA诱导、质粒诱导或两者共同诱导的结果。很强耐药基因组的质粒可以在各有不同生物体中会间发送到，从而推动抗基本功能性的传播。

本研究成果对人工渔场霍氏中会的喜云雾单胞酵母完再加了研究成果工作，深入探讨了其毒力因子可携带原因、病毒基本功能性有助于、病原学外观上和药敏特点。这为寻求应用于益生酵母正因如此抗生亦同以防控霍氏生物体基本功能性病虫害，并前提霍氏渔场业的肥胖症转变提供了实证。

论断

喜云雾单胞酵母可携带了7种毒力基因组，因此对人工渔场的霍氏造成了了强烈的病毒基本功能性基本功能性。它通过加剧骨髓、肾脏和骨髓等器官该组织的基本功能基本功能性妨碍，加剧RX-受损，甚至显然加剧遇害。在用药特异基本功能性总体，该除去酵母对多铜锣湾亦同、多粘酵母亦同B、庆大霉亦同和利福平等6种用药表现单单较高的特异基本功能性。

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