番茄严重皱纹病毒和番茄褪双色病毒，双重感染番茄植株缺乏协同效应

pGEM-T Easy载体上，用作QIAGEN质粒迷你准备试剂盒从选定的细菌中的提炼质粒。

为每种病毒病毒选取了三个解码并对其进行时脱氧核糖核酸，以进行时全面性统计分析，以确认增为子插入质粒和各自病毒病毒的辨别。

依靠NanoDrop对所含ToSRV插入器物和ToCV插入器物的两个质粒的DNA模板进行时量化，设立病毒病毒溶解度规范曲面。

在编码Hsp70h抗原的基因序列(tocv - f5′-GACCGAAGTGACACCAACCC-3′和tocv - r5′-TGGGACCGAGTACATTCCAAC-3′)对应的区域的设计tocv抗体双链进行时病毒病毒RNA量化。

为了量化病毒病毒DNA，在基因序列间区的设计tosrv抗体双链(tosrv - f5 ' -GCAACCGCCTCTAGCACTTC-3 '和tosrv - r5 ' -GACCTGGTCTCCCCAACAAGG-3 ')。

两对双链增为出有140 bp的片段。

RT-qPCR和qPCR在7500快速可实现PCR管理系统(Applied Biosystems)中的进行时。

用作GoTaq qPCR Master Mix 12.5μL，含提炼DNA或RNA的1.25μL(200 ngμ/L)， 6.25μL 2×GoTaq qPCR Master Mix，正向双链和偏移双链各0.62μL(10μm)， 0.19μL CXR参比染料，0.25μL GoScript RT Mix主要用途一步RT-qPCR无核酸激酶出水完成反应(主要用途RNA RT-qPCR)。

阴性结果表明用作出水和心理健康西瓜块茎的DNA/RNA作为原始器物料以此类推上述步骤，每个qPCR在每个块茎上以此类推列车运行。

通过对随机选取的增为子进行时氨基酸脱氧核糖核酸，属实了目标增为，增为后进行时熔融曲面统计分析。

ToSRV和ToCV的特性

解码的ToSRV增为子与GenBank中的ToSRV转化株的氨基酸序列完全相同，解码的ToCV增为子与GenBank中的ToCV转化株氨基酸序列的精确性为96% ~ 99%。

西瓜块茎的ToSRV和ToCV滴度

在两个受精阶段病毒烟粉啮MEAM1的Kada和Santa Clara西瓜进行时了两项独立国家检验，检验了ToSRV和ToCV在单病毒和总计病毒中的的滴度。

与病毒时间(15、30和45 DAE)和家养相关联，与另行病毒begomvirus的西瓜比起，两种试验车均未有观察到ToCV总计病毒西瓜的ToSRV滴度有显着的增效或骨骼肌作用。

总计病毒块茎的begomirus滴度略高于另行病毒每种病毒病毒的块茎;然而，很难观察到很大关联。

对于ToCV，总计病毒ToSRV的块茎和大外病毒ToCV的块茎的边缘病毒病毒溶解度除此以外很难很大关联。

豆科植器物受精

在30或45 DAE病毒ToSRV、ToCV或ToSRV + ToCV的Kada和Santa Clara西瓜块茎鲜重和干重与心理健康(相符合)西瓜块茎比起有很大关联，然而，单、双侵染块茎中间并相关联联。

经30 DAE处理方式，ToSRV、ToCV或ToSRV + ToCV的蒙特雷西瓜块茎干重分别比相符合减小25%、36%和33%。Kada块茎干重分别减轻39%、48%和40%。

病毒45 DAE的蒙特雷西瓜块茎干重分别减少18%、15%和31%，阿联酋西瓜块茎干重分别减少13%、21%和38%。

第二次测也得到了完全相同的结果。15 DAE时，ToSRV、ToCV和ToSRV + ToCV侵染的加田西瓜块茎干重分别比相符合减小40%、43%和37%。

病毒30 DAE的块茎干重分别减少35%、38%和37%。

大多数协作作用牵涉到在不相关的豆科植器物病毒病毒病毒同一宿主肝细胞时，然而，有一些内层允许病毒病毒和某种程度肝细胞解码病毒病毒中间的协作电磁场的比如说，如茴香病毒黄病毒病毒(LIYV)和甜菜花叶为病毒病毒(TuMV)，甜菜羽毛斑驳病毒病毒(SPFMV)和甜菜变黑绿色矮病毒病毒(SPCSV)中间的总计病毒。

本研究课题给予了一个DNA (ToSRV)和RNA (ToCV)病毒病毒中间缺少很大协作电磁场的比如说，它们病毒西瓜块茎的相异肝细胞。

虽然ToSRV在与ToCV总计病毒的块茎中的具有很高的滴度，但与分别病毒每种病毒病毒的块茎比起，Kada和Santa Clara块茎的这种降低并不很大，也一定会引发块茎受精实质性减小。

另行侵染和总计侵染的西瓜块茎的ToCV滴度无很大关联，对于DNA和RNA病毒病毒中间的电磁场，我们得到了完全相同的结果。

在大多数情况下，这种电磁场与显着的呕吐相关联，与基本上病毒比起，协作病毒病毒滴度的降低与crinivirus SPCSV滴度的都可减小相关。

本研究课题未有找到病毒病毒获取与豆科植器物受精中间存在相关性。

与心理健康西瓜块茎比起，ToSRV、ToCV或ToSRV + ToCV病毒块茎鲜重和干重很大减小，但这些性状在病毒块茎间无很大关联。

在第一个实验中的，Kada比Santa Clara受因素更大。

对于病毒ToSRV + ToCV的西瓜块茎，较年轻病毒块茎的受精受到的因素相等较来由病毒块茎，这似乎对产值的因素比重更大。

在两个独立国家的实验中的，在移植后15天病毒了这两种病毒病毒的选育马里亚纳西瓜块茎的产值比心理健康块茎减少了45.6%和54.5%。

移栽75 d后病毒的块茎，大外一次试验车产值升高平均6.3%。

我们对18个西瓜基因序列型对ToCV致黄病的耐受性进行时了统计分析，结果表明，与心理健康块茎比起，各基因序列型西瓜底下部干重和果实产值的升高波幅分别为1.4% ~ 67.6%和0.1% ~ 51.8%。

在双重病毒的西瓜块茎中的，ToSRV和ToCV的传播者率似乎不受因素。

烟粉啮MEAM1侵染基本上或总计侵染西瓜块茎时，ToCV和ToSRV的传播者率大致相同。

在西瓜块茎中的，ToSRV和ToCV的管理系统入侵动力学以及发病和发病也是如此。

很难解释在西瓜块茎中的DNA (ToSRV)和RNA (ToCV)病毒病毒中间很难很大的协作电磁场，几个变量似乎引发两种病毒病毒(如病毒病毒转化器物)中间牵涉到协作电磁场。

另一方面，西瓜块茎中的ToSRV和ToCV中间的一些相异外观上似乎解释了协作电磁场的缺失。

ToCV在肝细胞质中的解码，ToSRV则在肝细胞核中的解码。

ToSRV在西瓜块茎中的引致的呕吐主要出有现在上部叶为片，而ToCV呕吐出有现在来由叶为中的，常常到达幼叶为。

虽然ToSRV和ToCV在西瓜块茎中的很难找到很大的协作效应，但无论是基本上病毒还是混合病毒，两种病毒病毒均很大因素块茎的受精，从而引发产值的总数和质量升高。

因此，应转用由ToSRV引致的金花叶为病和由ToCV引致的西瓜变黄的管理方案，以尽量减少对西瓜作器物的危害。

根据两项独立国家试验车，与另行病毒比起，ToSRV和ToCV总计病毒对病毒病毒滴度和豆科植器物受精很难很大因素。

病毒ToSRV、ToCV和同时病毒的西瓜块茎干重关联不很大,与心理健康块茎比起，病毒ToSRV、ToCV和ToSRV + ToCV的蒙特雷西瓜块茎的干重高达分别减小了21.5%、25.5%和32%，阿联酋西瓜块茎的干重高达分别减小了31.7%、37.5%和38%。

在统计分析了采集的150株西瓜叶为片比对中的病毒病毒的发病率后，我们可以肯定地说，西瓜可以自然病毒一种或两种病毒病毒——48%的块茎双染，32%和20%的块茎大外病毒ToCV或ToSRV。

病毒ToSRV的西瓜块茎展示出为绿色斑、脉间变黑绿色、叶为片卷曲、上部叶为片锯齿状和受精迟缓，而病毒ToCV的西瓜块茎则展示出为脉间变黑绿，特别是在来由叶为片上，变脆，似乎有炎症白点和向上弯曲的边缘。

双重或多重病毒在豆科植器物病毒病毒中的很常见于，并似乎引发协作作用，降低一种或两种病毒病毒的解码。

电磁场还似乎因素寄主范围、媒介传播者率、一种或两种病毒病毒的肝细胞趋向性，以及豆科植器物受精和产值的量化和定性减小。

参考文献

[1]高文征，《西瓜变黑绿色病毒病毒病解剖工具研究课题及抗病基因序列初步适配》

[2]杜娇，《西瓜变黑绿色病毒病毒诱导寄主豆科植器物因素烟粉啮选取的机制研究课题》

[3]马滇南，《西瓜变黑绿色病毒病毒RT-PCR检验工具的优化及环保细胞内对西瓜变黑绿色病毒病毒病耐药性因素的研究课题》

[4]龚猛，《秋提早西瓜皱叶为病的牵涉到与防治》

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